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On veut mettre en
évidence le rôle joué par l'amylase, l'une des enzymes contenues dans
la salive et le suc pancréatique.
liste de matériel
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1 bain marie à 35°C
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1 bain marie à 100°c
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4 tubes à essai
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1 plaquette alvéolée
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1 stylo à verre
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2 pipettes compte gouttes (3ml) pour effectuer les
prélèvements
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1 pipette de 10ml pour prélever l'amidon
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2 pipettes de 1ml (pour l'eau et l'amylase)
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1propipette
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1 pissette d'eau
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1 flacon d'eau iodée avec bouchon compte gouttes
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1 flacon de liqueur de Fehling avec bouchon compte
gouttes
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Substrat : solution empois d’amidon
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Enzyme intervenant dans l’hydrolyse de macro
molécule alimentaire : amylase
Protocole
1- Préparer 4 tubes à essai :
- 2 tubes avec 10 ml d'empois d’amidon
(utiliser la pipette 10 mL et la propipette)
- 1 tube avec 0,1 ml d'amylase, soigneusement
identifié vers le haut du tube (utiliser la pipette 1 mL et la
propipette),
- 1 tube avec 0,1 ml d'eau, soigneusement identifié
vers le haut du tube (utiliser la 2ème pipette 1 mL et la propipette).
Rq : il est normal qu'il y ait très peu de liquide
dans les 2 derniers tubes.
2 - Au temps T= 0 (penser à déclencher le chronomètre), verser
un tube d’amidon dans le tube d'amylase et l'autre tube d'amidon dans
le tube d'eau (témoin),
A l'aide des pipettes compte gouttes,
faire immédiatement un prélèvement dans les deux tubes.
Déposer chaque prélèvement dans 1 alvéole
de la plaquette test
pour effectuer un test à l’eau iodée. Puis
mettre les tubes au bain marie à 35°C.
Le test à l’eau iodée se réalise sur
une plaquette avec alvéoles dans lesquelles vous déposez 2 gouttes de réactif
auxquelles vous ajoutez 4 gouttes de votre solution d'amidon.
Rq: Il est nécessaire d'identifier les tubes, les
pipettes compte gouttes et les alvéoles
(vous
pouvez écrire directement sur les tubes et les pipettes mais ne pas
écrire directement sur la plaquette
(utiliser
sur la petite feuille représentant la plaquette avec alvéoles)).
3 - A l'aide des pipettes compte gouttes, toutes les 3 minutes,
réaliser un nouveau prélèvement dans chaque tube et le tester à l'eau
iodée sur la plaque à alvéoles.
Lorsque l’un des tests deviendra
franchement négatif, on arrêtera la totalité de l’expérience.
4 - A la fin de l'expérience, faire
le test à la liqueur de Fehling :
• Récupérer vos 2 tubes dans le bain marie
• A l'aide du bouchon compte gouttes, verser, dans chaque tube 20
gouttes de liqueur de Fehling
• Mettre les tubes au bain marie à 100°C pendant 1 à 2 minutes,
• Observer le résultat.
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